病毒检测方法可以分为数量检测法和蚀班检测法，两种方法具体原理是什么  核酸检测“猎毒人”：与时间赛跑 与病毒较量

蚀斑检测法是检测活病毒（有感染力）数量的方法

• 病毒空斑实验是运用*普遍的病毒滴度检测方法之一。Renato Dulbecco在1952年首先采用这种方法来计算噬菌体的感染力，自那以后，这种方法被普遍用于各种病毒的定量 。 一个蚀斑通常是由*后感染培育的宿主细胞单层的一个病毒颗粒构成的。 为此，在做空斑实验时，需求将病毒液作10倍梯度延续稀释，再区分感染相应的敏感细胞单层，孵育一段时间后，在细胞单层上掩盖一层半固体培育基（*常用的是琼脂糖）以防病毒从一末尾的宿主细胞分散至左近未感染的细胞。这样，每个病毒颗粒会在单层细胞上形成一个由未感染细胞围绕的小圆斑即称为空斑，当空斑长到足够大时，可在显微镜下观察甚至直接肉眼可见。 图4为病毒空斑实验的基本流程。计数不同稀释度下的空斑构成数量可以知道每毫升病毒颗粒数或每毫升空斑构成单位（PFU）。由于每个空斑来自于后来的1个病毒颗粒，这样可以从单个空斑中纯化失掉来源于单个克隆的病毒种群。但很多时分，为了更清楚地区分空斑，需求对细胞用MTT或中性红等染料停止染色以添加细胞与空斑间的对比度。另外，细胞形状关于空斑实验成功与否也至关重要，需求运用途于对数生临时且生机大于95%的安康的宿主细胞。病毒空斑实验比拟费时，依据病毒种类不同，通常需求4-10天时间。还有，空斑实验只适用于那些可以繁衍并能感染培育细胞单层的病毒，以及可以破坏细胞的病毒。

图 1. 病毒空斑实验的流程。

• 资料与设备
• 细胞生长培育基：含10%FBS(胎牛血清), 4-6mM Glutamine（谷氨酰胺）的高葡萄糖DMEM，若有需求可参与青霉素，链霉素，庆大霉素，两性霉素等
• 成斑培育基：含2%FBS(胎牛血清), 4-6 mM Glutamine（谷氨酰胺）的高葡萄糖DMEM
• 宿主细胞
• PBS磷酸缓冲液
• 琼脂糖，超纯
• 空斑染色资料（MTT或中性红）
• 细胞培育级无菌超纯水
• 移液枪头(10 到100 微升)
• 6孔细胞培育板
• 离心管
• 水浴箱
• 微波炉
• 倒置显微镜
• 生物平安柜（超净台）
• 二氧化碳培育箱

• 实验方案

1. 细胞接种：每孔按1 x 106细胞每毫升培育基接种细胞至6-孔板里。悄然地前后左右摇晃培育板使细胞散布平均。将细胞置培育箱生长过夜。第二天，显微镜下观察细胞确认细胞能否散布平均并到达80%以上的融合度。
2. 制备琼脂糖：用水配制2%的琼脂糖，高压灭菌并使之溶化，然后将琼脂糖置于42°C水浴中使之坚持在熔解形状。将细胞培育基预热至37°C。（1h后确认琼脂糖温度能否处于42°C，观察其能否仍处于溶解形状但又不至于烫手）。
3. 预备病毒梯度稀释液：标志6个无菌离心管，用于制备病毒稀释液。在第1管内参与990μl，剩下5管区分参与900μl细胞生长培育基。按以下方法停止梯度稀释：在第1管中参与10μl病毒原液（稀释度1:100）充沛混匀，然后从第1管吸100μl参与第2管，依次类推，停止10倍梯度稀释。管2至管6的稀释度区分为 10-3 到 10-7。
4. 感染细胞单层：用无菌吸管吸去6孔板中的培育液，每孔参与100 μl上述稀释好的10-3 到 10-7 的病毒液，留一个孔不加作为空白对照。每板按异样的方法操作。室温放置1h让病毒进入宿主细胞。
5. 掩盖琼脂糖：1h后，小心吸去病毒液，防止碰到细胞。将2%的琼脂糖和预热的培育基按1:1的比例混匀后加悄然地加1.5mL至每孔细胞上，室温静置20min使其冷却凝结成掩盖层。将培育板置室温或 27°C 培育 6-10 日。
6. 空斑观察和计数：用光从45度角照射培育板，或许可以将培育板倒置在一个黑色背景上，计数空斑数量。为了更易于观察，也可以每孔参与1mL 0.03%的中性红（用水或PBS稀释），室温或27°C 孵育2-3h，未被病毒感染的细胞会被中性红染上而中间未被着色的小区域即为空斑（直径约为0.5-3mm）。计数每孔的空斑数量并按以下方法计算病毒滴度：病毒滴度（pfu/ml）=空斑数×(1 ml / 0.1 ml)/稀释倍数

结果图相似这种：

数量检测法是死活病毒都一同检测的方法，如今实验室普遍采用的是多聚酶链反响 (PCR)

PCR是用来检测病毒核苷酸的运用*广的方法之一。PCR剖析也可以用于病毒RNA的鉴定，只需先将RNA逆转录成DNA，然后再停止PCR剖析，这一方法被称之为逆转录PCR（RT-PCR）。实时PCR（或称为定量PCR，qPCR）是在反响进程中，实时对病毒核苷酸停止定量的方法。Real-time PCR有两种：一种是基于探针的叫TaqMan PCR，另一种是基于染料掺入的叫SYBR Green法。图2用表示图显示了Real-time PCR的基本原理。

图 2 Real-time PCR实验原理图。

文献来源： 快速病毒鉴定和定量检测方法综述

下面是病毒检测的基本方法， 水中的病毒典型的有诺如病毒，轮状病毒，肠道病毒71型，戊型肝炎病毒等。 需求针对这些病毒检查相应的检测方法，中文文献可以查一下。

也有文献引荐两种方法结合的。

水中病毒的检测还要触及稀释步骤， 也需查阅